詳細分析組織細胞固定液的使用方法
發(fā)布日期:2021-12-21 信息來源:鹽城溢之源生物科技有限公司
組織經(jīng)一系列的處理后,就必須進行固定,當(dāng)然有的組織是先固定,再進行處理,然后再固定。固定的作用,從組織學(xué)的角度其簡單的定義是,保持細胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu),使之盡量保持細胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu),而從免疫組化技術(shù)的角度,固定的作用不僅是使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固,盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng);防止細胞的自溶,以免使抗原擴散至組織間質(zhì);以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu);更重要的是保持組織或細胞的抗原性,不但要使抗原不導(dǎo)致失活,而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象,才能在免疫組化染色時,不產(chǎn)生過深的背景,影響對陽性物的判斷。
組織細胞固定液的使用說明:
1、對于細胞樣品,去除培養(yǎng)液后,按照每六孔板一個孔加入1毫升固定液的比例,加入 4%多聚甲醛固定液。對于細胞涂片等其它細胞樣品,加入固定液的量以充分蓋住樣品為準。通常室溫固定10-20分鐘即可,但固定較長時間,例如1-2小時也是可以的。后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?br />
2、對組織切片,加入4%多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準,或使用
染色架進行固定。通常室溫固定10-20分鐘即可完成固定,但切片較厚時可以固定較長時間,例如1-2 小時。后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?br />
3、對于組織塊樣品,浸泡入4%多聚甲醛固定液中,室溫或4℃浸泡固定2-24小時。建議不超過8小時,除非組織塊特別大,難以滲透。固定完成后,放入裝有蒸餾水的離心管中清洗,每15-30分鐘換一次,共6-8次,建議在搖床進行,或用流水沖洗1-2小時。隨后梯度脫水,進行包埋。如果暫時不包埋可放入70-75%的酒精中保存。